C18反相色譜柱每一根色譜柱都有一個(gè)大致的進(jìn)樣針數(shù)壽命,理論上可以有一個(gè)規(guī)定,達(dá)到進(jìn)樣多少針,就強(qiáng)制報(bào)廢。不過(guò)好像并沒(méi)有這樣的規(guī)定,那么也可以作為一個(gè)參考,當(dāng)色譜柱的柱性能參數(shù)(就是常說(shuō)的理論塔板數(shù)、分離度、拖尾因子等等)不達(dá)標(biāo)時(shí),參照進(jìn)樣針數(shù)判斷是柱子壽命到了,屬于不可逆因素,只能換柱子。還是其它原因,如流動(dòng)相配制錯(cuò)誤,或者流動(dòng)相變質(zhì)了,也可能稀釋液強(qiáng)度太大,也可能是方法就是錯(cuò)的,也可能是樣品本身問(wèn)題。
不過(guò)色譜柱的累積性損壞自然不是一朝一夕的事,柱性能是緩慢下降的,但是沒(méi)有一個(gè)特定的標(biāo)準(zhǔn),要看具體的分析方法,而且跟柱型號(hào)也有關(guān)系。常規(guī)的分析方法下C18反相色譜柱壽命是很長(zhǎng)的,因?yàn)镃18柱是目前技術(shù),質(zhì)量zui可靠,使用zui廣泛的色譜柱,在常規(guī)分析方法下,基本上不會(huì)損壞。但是如果流動(dòng)相比較特殊,如高鹽、高pH>8、低pH<1、高柱溫、高比例水相、高比例有機(jī)相等等,色譜柱的損壞就會(huì)相應(yīng)地加劇。
這
前面提到了柱型號(hào),不同型號(hào)的色譜柱壽命當(dāng)然也不一樣,跟前面說(shuō)到的C18反相色譜柱類(lèi)似的,CN柱、苯基柱等鍵合硅膠柱都具有較長(zhǎng)的使用壽命。不過(guò)所有基于硅膠基質(zhì)的色譜柱都有一個(gè)天生的弱點(diǎn),就是硅膠是能被水溶解的,雖然溶解度很小,但是長(zhǎng)年累月使用,尤其在反相色譜系統(tǒng)中,累加了高鹽、高pH、高柱溫、高比例水相等方法參數(shù)后,硅膠的流失尤為明顯。我做過(guò)一個(gè)項(xiàng)目,流動(dòng)相含鹽,柱溫高達(dá)50度,基本上一根色譜柱半年就報(bào)廢了。不過(guò),是有一種方法可以解決這個(gè)問(wèn)題的,就是在色譜柱前加一個(gè)柱芯與色譜柱類(lèi)型相同的預(yù)柱,也叫保護(hù)柱,當(dāng)流動(dòng)相里溶解預(yù)柱里的硅膠飽和以后,就不再侵蝕色譜柱的硅膠,從而大大延長(zhǎng)色譜柱壽命。不過(guò)不到萬(wàn)不得已還是不要使用特別苛刻的流動(dòng)相,要知道預(yù)柱的柱芯也是很貴的,那就是一根較短的色譜柱啊,就算保住了色譜柱,經(jīng)常換柱芯也是吃不消的。
還有一類(lèi)柱子,就是手性分離柱,這在醫(yī)藥行業(yè)是很大的一個(gè)應(yīng)用。通常手性色譜柱是正相柱,這就要求我們?cè)谑褂檬中灾耙劝严到y(tǒng)置換干凈,再接上柱子用流動(dòng)相沖洗平衡進(jìn)樣。通常是甲醇、異丙醇、正已烷+異丙醇、流動(dòng)相這樣的順序,如果忘記這個(gè)過(guò)程,會(huì)造成很大的麻煩。而且有一些手性柱是涂敷柱,例如淀粉、纖維素等大分子涂敷柱非常怕水,如果系統(tǒng)中原來(lái)的反相流動(dòng)相沒(méi)有置換干凈,就會(huì)對(duì)色譜柱造成不可逆損傷,甚至報(bào)廢。近年來(lái),科學(xué)家也開(kāi)發(fā)出了鍵合的手性柱,相比較要穩(wěn)定的多,甚至也可以應(yīng)用反相色譜系統(tǒng)。
使用后對(duì)色譜柱的沖洗保存也比較重要,使用了緩沖系統(tǒng)的尤其要注意。這里推薦一個(gè)反相色譜系統(tǒng)的通用沖洗流程:將所有通道置換成含有較低有機(jī)相比例的水相中,比如10-30%乙腈或甲醇,然后沖洗1個(gè)小時(shí),然后再梯度增加有機(jī)相比例,各沖洗一定時(shí)間,zui終保留在高有機(jī)相比例的沖洗液里。低有機(jī)相比例的沖洗液是為了盡可能地沖洗緩沖鹽。通常低壓梯度洗脫的液相色譜儀采用的是四元泵,就是單泵四通道,比例閥混合。這種混合方式有個(gè)弊端,就是混合效果差,因?yàn)楦魍ǖ啦煌壤峭ㄟ^(guò)開(kāi)關(guān)各通道閥的時(shí)間來(lái)控制的。打比方乙腈:緩沖鹽=50:50,如果流速是1.0mL/min,并不是說(shuō)乙腈和緩沖鹽以各0.5mL/min的流速來(lái)混合;而是流速一直是1.0mL/min,但是在往復(fù)泵一個(gè)來(lái)回的時(shí)間內(nèi),兩個(gè)通道分別打開(kāi)一半的時(shí)間,也就是說(shuō)系統(tǒng)管道里是一段乙腈、一段緩沖鹽。這樣就會(huì)造成鹽的析出。所以,往往是兩通道混合,就算沒(méi)有用緩沖鹽,還是建議先按比例混合好了,然后走單通道,否則的話一樣會(huì)造成鹽析出,或者基線波動(dòng)。走梯度洗脫的話,往往會(huì)把有機(jī)相通道(B)中加入一定比例的水,或者把水相通道(A)配成梯度洗脫的初始比例,把有機(jī)相通道(B)配成梯度洗脫zui終的比例。
這里有兩點(diǎn)需要說(shuō)明,*,一般認(rèn)為,色譜系統(tǒng)包括色譜柱的沖洗甚至保存,都可以使用流動(dòng)相,只是不加緩沖鹽、酸堿等。例如上面提到的乙腈:緩沖鹽=50:50,做完樣品以后,就可以用50%乙腈/水來(lái)沖洗保存。有一些品牌色譜柱,例如資生堂,建議如果不是含鹽或者強(qiáng)酸強(qiáng)堿,一般不建議沖洗。不過(guò)這只適合短期保存,也就是沒(méi)隔多久又要再次使用。長(zhǎng)期不用的色譜系統(tǒng)包括色譜柱還是應(yīng)該沖洗后保存在高比例低極性溶劑體系中。一般建議正相系統(tǒng)保存在正已烷:異丙醇=90:10,反相系統(tǒng)保存在乙腈:水=90:10或者100%乙腈中。第二,隨著快速分離色譜柱的發(fā)展,很多的低粒徑色譜柱得到應(yīng)用,而且往往柱溫也較高,通常達(dá)到50度或以上,這種色譜系統(tǒng)通常柱壓也較高,貿(mào)然用高比例水相沖洗可能會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)超壓。可以先用流動(dòng)相沖洗,或者斷開(kāi)色譜柱,用高比例水相沖洗系統(tǒng),再接上柱子逐步提高有機(jī)相比例沖洗,也可以先調(diào)低流速?zèng)_洗。而且,待沖洗快要結(jié)束時(shí)再降低柱溫。