陰陽離子交換色譜柱在日常使用過程中,盡管保護嚴格,樣品和流動相盡管經(jīng)過前處理,但經(jīng)過長時間的使用,仍然難以*避免柱子受到污染,固定相流失、板結、柱床塌陷以及柱效下降等。有些可以通過維修,使部分柱效恢復。
柱污染再生技術
陰陽離子交換色譜柱污染后,可以用合適的溶劑沖洗,使柱效再生。C18柱常規(guī)的再生洗滌方法是:分別用甲醇、三氯甲烷、甲醇/水各60 mL依次通過色譜柱,再用100%甲醇60 mL平衡色譜柱后封存,柱效將恢復正常。必要時,根據(jù)柱污染性質(如有機污染、鹽類污染等),采用0.05 mol/L H2SO4、0.5 mol/L H3PO4或0.1 mol/L EDTA鈉鹽沖洗,然后再用水沖洗,zui后用100%甲醇平衡色譜柱后封存。對于嚴重污染的C18柱,可采用水、甲醇、氯仿、乙烷依次沖洗后,按順序倒過來再沖洗1次,每次所用溶劑60 mL,不接檢測器,zui后用100%甲醇平衡色譜柱封存。
柱污染的修復
在陰陽離子交換色譜柱污染再生無效或已知柱污染嚴重時,可以采用柱修補的方法解決,但柱污染深度不宜超過5 mm。方法是將特制小鏟將污染部分挖去,再用與柱填料相同的固定相與流動相混合制成漿狀,然后將漿狀固定相仔細補入被挖去的部分(盡量使后填補的固定相接近原裝的緊密程度),修平端面即可。修好的柱子如果柱頭兩端的篩板的孔徑是一致的,可將柱子顛倒過來使用一般時間,目的是借助流動相沖洗作用,恢復柱床緊密程度。
柱塌陷的修復
陰陽離子交換色譜柱塌陷的原因很多。對于塌陷不太嚴重時,如果柱頭兩端的篩板孔徑是一致的,可將柱顛倒使用一般時間,即可恢復性能。當塌陷嚴重(5 mm左右)時,可采用柱污染的修復方法修補即可。