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探究離子色譜柱分離效果的鑒定方法

更新時(shí)間:2017-11-27瀏覽:1957次
離子色譜柱是在色譜分離系統(tǒng)中用來分離檢測樣品的儀器,它是色譜分離系統(tǒng)的心臟,起著至關(guān)重要的作用。因此,選擇一個(gè)好的色譜柱對氣相色譜儀、液相色譜儀的分析速率可以大大提高,要求是柱效高、選擇性好,分析速度快。
離子色譜柱柱的分離效率由理論塔板數(shù)(簡稱柱效,N)判定,柱效取決于固定相的種類、性質(zhì)(粒度、粒徑分布等)、填充狀況、柱長、流動(dòng)相的種類和流速及測定柱效所用物質(zhì)的性質(zhì)。N如果峰形對稱并符合正態(tài)分布,可近似表示為:N=16(Tr/W)^2=5.54(Tr/W(1/2))^2=L/H,顯然,N值越大,或H值越小,柱效越高。因此,分離效果主要取決于所選擇的固定相。
固定相的選擇對樣品的分離起著重要作用,在色譜分離中固定不動(dòng),使樣品保留并使之分離。不同類型的色譜采用不同的固定相,如氣-固色譜的固定相為各種具有吸附活性的固體吸附劑;氣-液色譜的固定相是載體表面涂漬的固定液,液相色譜中的固定相為各種鍵合型的硅膠小球,離子交換色譜中的固定相為各種離子交換劑,排阻色譜中的固定相為各種不同類型的凝膠等,常見的吸附柱填料為硅膠柱。
離子色譜柱的性能除了與固定相性能有關(guān)外,還與填充技術(shù)有關(guān)。在正常條件下,填料粒度> 20um時(shí),干法填充制備柱較為合適;顆粒< 20um時(shí),濕法填充較為理想。填充方法一般有四種:高壓勻漿法,多用于分析柱和小規(guī)模制備柱的填充;徑向加壓法,Waters;軸向加壓法,主要用于裝填大直徑柱;干法,柱填充的技術(shù)性很強(qiáng),大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用已填充好的商品柱。必須指出,液相色譜柱的獲得,裝填技術(shù)是重要環(huán)節(jié),但根本問題還在于填料本身性能的優(yōu)劣,以及配套的色譜儀系統(tǒng)的的結(jié)構(gòu)是否合理。
柱效受柱內(nèi)外因素影響,為使色譜柱達(dá)到*效率,柱外死體積要小外,還要有合理的柱結(jié)構(gòu)(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術(shù)。即使的裝填技術(shù),在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的,靠近管壁的部位比較疏松,易產(chǎn)生溝流,流速較快,影響沖洗劑的流形,使譜帶加寬,這就是管壁效應(yīng)。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中,柱外效應(yīng)對柱效的影響遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于管壁效應(yīng)。
評判色譜柱的好壞,使用前都要對其性能進(jìn)行考察,使用期間或放置一段時(shí)間后也要重新檢查。柱性能指標(biāo)包括在一定實(shí)驗(yàn)條件下(樣品、流動(dòng)相、流速、溫度)下的柱壓、理論塔板數(shù)、對稱因子、容量因子和選擇性因子的重復(fù)性,或分離度。一般說來容量因子和選擇性因子的重復(fù)性在±5%或±10%以內(nèi)。進(jìn)行柱效比較時(shí),還要注意柱外效應(yīng)是否有變化。具體操作方法如下:
1、在進(jìn)行樣品檢測前,至少使用20倍柱體積流動(dòng)相使色譜柱充分平衡。流動(dòng)相一定要使用色譜級(jí)別的溶劑。如使用水相的緩沖液應(yīng)當(dāng)天配制以保持新鮮避免細(xì)菌產(chǎn)生。
2、流動(dòng)相使用前需用微孔濾膜過濾,消除流動(dòng)相中顆粒對色譜系統(tǒng)和色譜柱的損壞。緩沖液與其他流動(dòng)相混合后應(yīng)重新過濾避免溶解度變化造成產(chǎn)生新的沉淀。不應(yīng)使用純水作為流動(dòng)相沖洗C18色譜柱,以免柱性能損壞(添加5%的有機(jī)溶劑沖洗色譜柱,同時(shí)可以達(dá)到對緩沖鹽清洗的作用。還可以使色譜柱更容易平衡)。
3、流動(dòng)相需脫氣后使用,可避免因氣泡導(dǎo)致的泵和檢測器的工作不正常。如果測試時(shí)使用的流動(dòng)相與色譜柱保存使用的流動(dòng)相有較大區(qū)別,應(yīng)該使用過度分布的形式進(jìn)行平衡。避免由于流動(dòng)相的突然變化造成柱壓增加過大或流動(dòng)相緩沖鹽結(jié)晶造成對色譜柱和儀器系統(tǒng)的損壞。正相色譜柱比反相色譜柱需要更長的平衡時(shí)間。
 
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