解讀氨基柱測(cè)酸性樣品的HILIC模式

●氨基柱測(cè)酸性樣品,應(yīng)該是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對(duì)于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議:用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨),之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0.1%。

●氨基柱不能在低PH值下使用,會(huì)水解的,這樣柱子就報(bào)廢了。

●關(guān)于反沖的問題,只要是柱子端頭和端尾篩板直徑一致,*可以反沖,并且反沖對(duì)柱子是很有必要的,因?yàn)榱鲃?dòng)相長(zhǎng)時(shí)間往一個(gè)方向流動(dòng)會(huì)造成C18官能團(tuán)朝一個(gè)方向“倒伏”,這樣對(duì)分析造成影響,反沖可以使官能團(tuán)“豎立”,對(duì)分析有利。

●如果用一個(gè)質(zhì)量好的又和分析柱匹配保護(hù)柱,應(yīng)該不會(huì)影響分析。匹配指的選用柱芯填料和分析柱填料在粒徑和固定相類型上一致,質(zhì)量好,首先要求柱芯裝填質(zhì)量一定要好,不能因?yàn)槭侵?就隨便把填料用干法往里面一放就完事了;另外柱芯卡套接入系統(tǒng)的產(chǎn)生的死體積要小。

一個(gè)質(zhì)量好的保護(hù)柱,有時(shí)還能增加分離柱效。

●用的是四元梯度泵A50%甲醇B50%水經(jīng)常出現(xiàn)?；蜻M(jìn)氣泡這是什么原因:這個(gè)比例下因?yàn)槭沟昧鲃?dòng)相黏度zui大,所以zui容易產(chǎn)生氣泡了,一般我們?cè)O(shè)計(jì)洗脫程序都避開這個(gè)比例。

●水/甲醇比例在55:45時(shí),黏度和柱壓有個(gè)極大值。50:50接近了這個(gè)極值,柱壓是比較高的,但影響柱壓zui大的還是填料粒徑和色譜柱內(nèi)徑。系統(tǒng)壓力高,可能會(huì)因溶劑泵中的過濾頭供液速度跟不上而導(dǎo)致氣泡進(jìn)入系統(tǒng),停機(jī)也應(yīng)該是因?yàn)闅馀葸M(jìn)入壓力下降的原因,可考慮更換液體通量更大的過濾頭。

●色譜柱被強(qiáng)保留物質(zhì)污染后,保留時(shí)間提前和滯后的情況都有,具體要看污染物的性質(zhì),還要看分析物、固定相和污染物三者共同作用的情況,情況比較復(fù)雜,有時(shí)候比較難預(yù)測(cè)是提前還是滯后。不過你平時(shí)維護(hù)的時(shí)候,注意在測(cè)定后將污染物用有機(jī)溶劑反沖清洗,就可以減輕或避免這種情況的出現(xiàn)。建議每個(gè)分析方法用專門的色譜柱,長(zhǎng)遠(yuǎn)看,這樣更節(jié)省色譜柱的費(fèi)用。

●色譜技術(shù)中的化學(xué)衍生法系指在色譜過程中用特殊的化學(xué)試劑(一般稱為衍生化試劑或標(biāo)記試劑)使樣品成分轉(zhuǎn)變相應(yīng)的衍生物之后進(jìn)行分離檢測(cè)或進(jìn)行檢測(cè)的方法。目的為:1.將紫外—可見強(qiáng)吸收功能基團(tuán)引入被檢測(cè)對(duì)象或?qū)⑵滢D(zhuǎn)變?yōu)闊晒庋苌?以提高檢測(cè)靈敏度;2提高對(duì)分析樣品的分離和選擇性。長(zhǎng)度和粒徑都是用來改變柱效的,氨基柱選擇原則是夠用就好。