凝膠色譜柱主要用于相對分子質(zhì)量分布測試

　　凝膠色譜技術(shù)是六十年代初發(fā)展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術(shù),由于設(shè)備簡單、操作方便,不需要有機溶劑,對高分子物質(zhì)有很高的分離效果。凝膠色譜法又稱分子排阻色譜法。凝膠色譜柱主要用于高聚物的相對分子質(zhì)量分級分析以及相對分子質(zhì)量分布測試。目前已經(jīng)被生物化學(xué)、分子生物學(xué)、生物工程學(xué)、分子免疫學(xué)以及醫(yī)學(xué)等有關(guān)領(lǐng)域廣泛采用,不但應(yīng)用于科學(xué)實驗研究,而且已經(jīng)大規(guī)模地用于工業(yè)生產(chǎn)。

　　根據(jù)分離的對象是水溶性的化合物還是有機溶劑可溶物,凝膠色譜柱又可分為凝膠過濾色譜(GFC)和凝膠滲透色譜(GPC)。凝膠過濾色譜一般用于分離水溶性的大分子,凝膠過濾色譜柱如多糖類化合物。凝膠的代表是葡萄糖系列,洗脫溶劑主要是水。凝膠滲透色譜法主要用于有機溶劑中可溶的高聚物相對分子質(zhì)量分布分析及分離,常用的凝膠為交聯(lián)聚苯乙烯凝膠,洗脫溶劑等有機溶劑。

　　凝膠色譜柱不但可以用于分離測定高聚物的相對分子質(zhì)量和相對分子質(zhì)量分布,同時根據(jù)所用凝膠填料不同,可分離油溶性和水溶性物質(zhì),分離相對分子質(zhì)量的范圍從幾百萬到100以下。近年來,凝膠色譜柱也廣泛用于分離小分子化合物。化學(xué)結(jié)構(gòu)不同但相對分子質(zhì)量相近的物質(zhì),不可能通過凝膠色譜法達(dá)到*的分離純化的目的。

　　一個含有各種分子的樣品溶液緩慢地流經(jīng)凝膠色譜柱時,各分子在柱內(nèi)同時進(jìn)行著兩種不同的運動:垂直向下的移動和無定向的擴散運動。大分子物質(zhì)由于直徑較大,不易進(jìn)入凝膠顆粒的微孔,而只能分布顆粒之間,所以在洗脫時向下移動的速度較快。小分子物質(zhì)除了可在凝膠顆粒間隙中擴散外,還可以進(jìn)入凝膠顆粒的微孔中,即進(jìn)入凝膠相內(nèi),在向下移動的過程中,從一個凝膠內(nèi)擴散到顆粒間隙后再進(jìn)入另一凝膠顆粒,如此不斷地進(jìn)入和擴散,小分子物質(zhì)的下移速度落后于大分子物質(zhì),從而使樣品中分子大的先流出色譜柱,中等分子的后流出,分子小的后流出,這種現(xiàn)象叫分子篩效應(yīng)。具有多孔的凝膠就是分子篩。