C18反相液相色譜柱是一種常用的色譜柱產(chǎn)品,主要由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成,被廣泛用于多個(gè)領(lǐng)域中。在c18反相液相色譜柱的使用中,保持色譜柱的柱效、容量和滲透特性,延長(zhǎng)柱子的使用壽命非常重要。使用時(shí)間后就會(huì)出現(xiàn)柱壓升高、柱效降低、峰形畸變和分離度降低、保留時(shí)間改變等變化,如不采取措施,將會(huì)縮短色譜柱的使用壽命,影響工作效率,并造成一定的經(jīng)濟(jì)損失。
C18反相色譜柱操作步驟:
1.平衡開始時(shí)將流速緩慢地提高,用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線(緩沖鹽或離子對(duì)試劑流速如果較低,則需要較長(zhǎng)的時(shí)間來平衡)
2.如果使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽,應(yīng)注意用純水”過渡”即每天分析開始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動(dòng)相平衡;分析結(jié)束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護(hù)柱子。
C18反相色譜柱的清洗:
1、如果您的樣品分析只用到一般的甲醇,乙腈和水的流動(dòng)相(包括流動(dòng)相里面加了點(diǎn)酸),在做完樣品后可直接用65%的乙腈/水或者純甲醇進(jìn)行清洗40~60mins即可保存;
2、如果您的樣品分析用到了含緩沖鹽或者酸或者離子對(duì)試劑的流動(dòng)相,在做完樣品后的清洗必須按照下列2個(gè)步驟進(jìn)行清洗柱子(不論您的柱子是否是可以過純水的極性柱子還是一般的通用性柱子):
a、重要的步驟——用5%的乙腈(甲醇)/水,清洗80ml溶劑以上(250mm色譜柱,150長(zhǎng)度的柱子需要至少60ml溶劑清洗),1~2ml/min(根據(jù)時(shí)間自由調(diào)節(jié)流速;LC/MS柱子應(yīng)以0.2ml/min的流速進(jìn)行),如果因?yàn)闀r(shí)間來不及而清洗不了那么長(zhǎng)時(shí)間,可以適當(dāng)加大流速,比如1.5 or 2ml/min;
b、65%的乙腈(甲醇)/水或者純甲醇/乙腈,清洗30~60mins,1~2ml/min。