關于常見色譜柱的認識誤區(qū)(二)

　　誤區(qū)4、至少需要10個柱體積才能重新使LC色譜柱達到平衡

　　平衡時間對于梯度色譜來說是非常重要的，因為它是整個技術的限制因素。這有兩種平衡類型：重復平衡和*平衡。重復平衡也就意味著在無法實現*平衡的情況下達到的平衡。

　　實際上，如果在隨后的運行中，保留時間的重復性是小于0.002min的，然后對于非離子化溶質的無緩沖洗脫劑和堿性化合物以常用的甲酸為添加劑的話，重復平衡在兩個柱體積的范圍內即可實現。

　　誤區(qū)5、相較之純的多孔粒子，表面多孔顆粒會顯著降低樣品容量

　　HPLC色譜柱填料對樣品的容量是與其表面積成正比的，這與硅醇基通過單體鍵合形成的化學鍵合相的量相關。然而，研究結果表明：在相同的試驗條件下，表面多孔顆粒與多孔粒子對樣品的容量是基本上相同的。

　　誤區(qū)6、UHPLC填料柱比常見的HPLC填料柱更容易堵塞

　　隨著柱填料多孔材料粒徑的不斷減小，使得柱的主要硬件設計跟著一起發(fā)生變化。對于sub-2μmUHPLC柱的堵塞，是樣品和流動相物質倒伏在柱入口的結果。如果你在進樣前對樣品進行了凈化，如使用固相萃取、過濾或離心等，就可以避開任何污染問題。

　　誤區(qū)7、保護柱是沒必要的

　　使用保護柱有很多好處。首先，保護柱可以防止化學物質或顆粒物損壞分析柱。其次，相較之更換一根昂貴的分析柱，更換一根5mm的保護柱只需要很少的花費?，F代的保護柱具有幾乎無死體積、更換快速，以及適用于UHPLC的高壓等優(yōu)點。

　　誤區(qū)8、你不可以將HPLC色譜柱反接以便于沖洗掉其中的顆粒物

　　實際上HPLC色譜柱的填裝壓力比大使用壓力高很多（通常會高2倍）。如果裝柱時使用了恰當的勻漿劑，并且分配一定的時間使柱床穩(wěn)定，一支填裝良好的色譜柱是*可以雙向使用的。

　　誤區(qū)9、色譜柱填料粒徑越小、壓力越高，分離效果越好

　　現代色譜柱的柱特性研究已經引發(fā)出一些新方法來評估一根色譜柱的性能。例如，采用新的表面多孔材料的色譜柱，其柱效與sub-2μmUHPLC柱效一樣好，然而與常規(guī)的LC填料色譜柱比起來，柱壓很低。

　　誤區(qū)10、柱壓不會影響色譜分離效果

　　色譜的很多參數都是受柱壓影響的，包括部分溶質的摩爾體積、停滯體積、柱孔隙度、保留因子、流動相密度、介電常數、固定相結構、pH值和電離常數等。

　　當色譜柱在約2000psi（13.789MPa）壓力下運行時，即使保留時間上存在小差異，也并不會引起我們的注意；特別是如果重復性較好及定量不受影響的時候。但是，當柱壓接近2000psi（13.789MPa）時，柱壓的影響可能就相當明顯了。