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疏水色譜柱正確的安裝步驟是如何的!

更新時間:2021-05-13瀏覽:1593次
   疏水色譜柱能夠有效分離抗體的結(jié)構(gòu)同分異構(gòu)體。在抗體藥物中,對于一些由于等電點相同而無法通過離子交換色譜法實現(xiàn)分離的,但表面疏水性有差異的結(jié)構(gòu)同分異構(gòu)體、或多聚體,可以考慮使用疏水色譜法來進行分析。并且疏水色譜法也可以用于抗體降解產(chǎn)物的分析。
  疏水色譜柱安裝的正確步驟如下:
  1、使用新鮮潔凈的水與乙腈。沖洗系統(tǒng),確保系統(tǒng)干凈,不含任何緩沖鹽和污染物。
  2、取用色譜柱時避免磕碰掉落。
  3、將疏水色譜柱入口端連接到系統(tǒng)上,柱出口端先不要連接,色譜柱身上有箭頭標明正確流向。
  4、在0.1mL/min流速條件下用純乙腈潤洗色譜柱,然后在2分鐘內(nèi)將流速升至0.5mL/min。
  5、當溶劑均勻的從柱出口端流出,停流速,將色譜柱出口端接到系統(tǒng)檢測器上(這樣可以避免氣泡進入檢測系統(tǒng),并且可快速達到基線平衡)。
  6、重啟流速,按照步驟4的方法逐漸提高流速,至常規(guī)分析時所使用的流速。
  7、參考柱效測試報告中的方法,使用該流動相條件平衡色譜柱,通常需要使用5-10倍柱體積的流動相,直至壓力與基線穩(wěn)定。
  8、測試疏水色譜柱柱效。如果沒有柱效測試報告中的分析物,請廠家部門尋求支持,使用合適的濃度與進樣量。柱效結(jié)果略低于柱效測試報告屬正常情況。如結(jié)果明顯偏低、峰形拖尾,提示色譜柱和/或所使用的液相系統(tǒng)處于非理想狀態(tài),需要進行故障排查。當使用2.1mm內(nèi)徑色譜柱時,建議優(yōu)化系統(tǒng)以減少譜帶展寬,包括:使用檢測器微量流通池,減少進樣器loop環(huán)體積,使用較小內(nèi)徑(如0.005''或0.12mm)的系統(tǒng)管路。并確保管路與疏水色譜柱連接恰當、無死體積。
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