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脂質(zhì)納米粒(LNP)SEC分析的色譜柱選擇

更新時(shí)間:2022-11-01瀏覽:1186次

2018年,全球款采用脂質(zhì)納米粒 (LNP) 遞送siRNA的核酸藥物獲批。近,由于新的脂質(zhì)成分及生產(chǎn)方法的研發(fā),開(kāi)發(fā)了針對(duì)SARS-CoV-2冠狀病毒的LNP遞送的mRNA疫苗。該LNP的模式圖、示意圖如下。

 

LNP1.png

圖1  雙層脂質(zhì)體(左)和單層脂質(zhì)體(右)

 



文獻(xiàn)介紹



近期,在 J. Chromatogr. B 期刊上發(fā)表的一篇研究文獻(xiàn)中,作者等人認(rèn)為L(zhǎng)NP的大小和mRNA含量 (payload) 對(duì)于了解藥效和副作用是非常重要的。因此采用了尺寸排阻色譜,并在UV檢測(cè)器、RI檢測(cè)器以及MALS檢測(cè)器上直接連接了動(dòng)態(tài)光散射 (DLS) 檢測(cè)器,在線(xiàn)進(jìn)行LNP的粒徑分析。

LNP2.png

文獻(xiàn)鏈接:https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2021.123015

遞送mRNA的LNP是表面帶正電荷的陽(yáng)離子LNP,采用了適合分離陽(yáng)離子大分子的SEC色譜柱TSKgel G6000PWXL-CP,有效分離出半徑30~70 nm的各種LNP。另外,還可以看出,SEC的在線(xiàn)分析結(jié)果與離線(xiàn)分析結(jié)果非常吻合,并且mRNA含量受到LNP的PEG修飾脂質(zhì)含量的影響。

LNP3.png

圖2. 采用G6000PWXL-CP色譜柱分離4個(gè)mRNA-LNP

 

 




LNP分析用SEC色譜柱的選擇



 



陽(yáng)離子LNP的分離

陽(yáng)離子LNP的SEC分離與陽(yáng)離子聚合物的分離基本相同。對(duì)于直徑在60~140 nm的LNP,推薦使用TSKgel G6000PWXL-CP;直徑在20~100 nm的LNP,推薦使用TSKgel G5000PWXL-CP。

非陽(yáng)離子(中性或陰離子)LNP、脂質(zhì)體

LNP與脂質(zhì)體基本相同,但脂質(zhì)體是中性脂質(zhì)成分的粒子,可以用普通PWXL系列色譜柱分析。對(duì)于直徑在60~140 nm的非陽(yáng)離子LNP,推薦使用TSKgel G6000PWXL或TSKgel G-DNA-PW;直徑在20~100 nm的LNP,推薦使用TSKgel G5000PWXL。

 




LNP分析用色譜柱產(chǎn)品信息



 



LNP4.png

 

 








參考文獻(xiàn):

1. S. Daniel et al., Quality by design for enabling RNA platform production processes, Trends in Biotechnology, 2022, ISSN 0167-7799, CC BY

https://doi.org/10.1016/j.tibtech.2022.03.012

2. C. Widmann [white paper] Regulatory consideration for excipients used in lipid nanoparticles, Bioprocess International, by BPI contributor, Thursday June 9, 2022,

3. X. Jia et al., Enabling online determination of the size-dependent RNA content of lipid nanoparticle-based RNA formulations, J. Chromatography B, 1186 (2021) 123015, CC BY NC ND, https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2021.123015  

4. J. Zhang et al., Polydispersity characterization of lipid nanoparticles for siRNA delivery using multiple detection size-exclusion chromatography,

Anal. Chem., 84 (2012) 6088-6096, https://doi.org/10.1021/ac3007768

 

 

 

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