【技術(shù)分享】SEC分析中樣品吸附的改善——流動相及色譜柱應(yīng)對策略

使用尺寸排阻色譜法（SEC）分離生物大分子時，有時會發(fā)生因樣品吸附在色譜柱上，而導(dǎo)致色譜圖變化或出現(xiàn)異常洗脫峰的現(xiàn)象。該現(xiàn)象往往是樣品的疏水性和靜電作用引起的，有時在分離時反映為色譜柱間差異。為解決這類問題，可以通過向流動相中添加各種試劑來抑制吸附，以實現(xiàn)正常的SEC分離。

我們匯總了可以抑制樣品與色譜柱之間相互作用的試劑種類，并歸納了不同SEC流動相改善色譜分離效果的示例。希望能給大家的分析工作提供參考。

一、可添加試劑的種類及效果

二、不同SEC流動相的改善示例

下表是按照樣品分類歸納了SEC流動相對樣品吸附、相互作用的改善示例。雖然在出現(xiàn)靜電相互作用時，向流動相中添加鹽便可抑制，在發(fā)生疏水相互作用時，選擇哪種添加試劑是非常重要的。

另外，由于添加試劑可能會導(dǎo)致生物大分子的結(jié)構(gòu)發(fā)生顯著變化、失活或變性，因此需要特別注意。

三、色譜柱的老化處理

在SEC色譜柱的使用初期，常會出現(xiàn)蛋白質(zhì)多聚體等物質(zhì)吸附于色譜柱的現(xiàn)象。防止該現(xiàn)象的對策是可以對色譜柱進行老化處理（預(yù)處理）。

請在色譜柱的老化處理后分析目標樣品，確認多聚體等物質(zhì)的洗脫峰面積已經(jīng)穩(wěn)定。不過，色譜柱的老化處理是最后的辦法，建議大家盡量去找到合適的流動相以抑制吸附。如果您有色譜柱使用或維護保養(yǎng)方面的任何問題，歡迎聯(lián)系東曹技術(shù)中心。