【技術分享】參照USP129修訂案建立單克隆抗體的SEC-UHPLC分析方法

繼USP621修訂版生效之后，美國藥典又于2023年5月在PF49（3）中提議對通則<129治療性重組單克隆抗體藥物的分析方法(Analytical Procedures for Recombinant Therapeutic Monoclonal Antibodies) 進行修訂：針對用于蛋白質SEC分析的L59型色譜柱，增加超高速、高性能的UHPLC色譜柱，即補充了單克隆抗體的SEC-UHPLC的分析方法。經(jīng)過開放評議后，本次修訂案作為USP-NF2024, Issue 3, 于2023年12月1日正式公布。如表1所示，對原有的L59型色譜柱尺寸（30 cm）增加了UHPLC專用的30 cm色譜柱。

表1. L59型色譜柱同時收錄了TSKgel G3000SWXL和TSKgel UP-SW3000

一、從SEC-HPLC轉換為SEC-UHPLC時的條件變更

USP中規(guī)定了使用L59型色譜柱分析抗體的多聚體、單體和片段。其中，比較有代表性的是將TSKgel G3000SWXL（5μm, HPLC）轉換為TSKgel UP-SW3000-LS（2μm,UHPLC) 。除此以外，還可以將用于分離抗體片段的TSKgel G2000SWXL色譜柱轉換為TSKgel UP-SW2000。將用于分離多聚體的TSKgel G4000SWXL（8μm）轉換為TSKgel UP-SW Aggregate（3μm），分析條件的變更請參照表2。

表2.從HPLC色譜柱轉換為UHPLC色譜柱時分離條件的變更

二、單克隆抗體的SEC-UHPLC分析實例

圖1是在分析單克隆抗體時，從30cm的G3000SWXL色譜柱轉換為15 cm的UP-SW3000-LS色譜柱，在保持同等分離度的前提下，分析時間縮短為50%，流動相減少約80%。

圖1. SEC-HPLC (30 cm色譜柱) 轉換為SEC-UHPLC (15 cm色譜柱) 的分離例