反相色譜是迄今在高效液相色譜中應(yīng)用*廣泛的技術(shù),主要是因為它適用于分析極大多數(shù)的非極性物質(zhì)和很多的可離子化的及離子化合物。大多數(shù)用于反相色譜的固定相本質(zhì)上都是疏水物質(zhì),因此,分析物是按照它們與固定相的疏水相互作用的大小程度來分離的,樣品基體中其它疏水雜質(zhì)組分也能以同樣的方式保留。
反相色譜柱是一種常用的色譜柱產(chǎn)品,主要由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成,被廣泛用于多個領(lǐng)域中。在反相色譜柱的使用中,保持色譜柱的柱效、容量和滲透特性,延長柱子的使用壽命非常重要。使用時間后就會出現(xiàn)柱壓升高、柱效降低、峰形畸變和分離度降低、保留時間改變等變化,如不采取措施,將會縮短色譜柱的使用壽命,影響工作效率,并造成一定的經(jīng)濟損失。
反相色譜柱在使用緩沖液的過程中還要注意以下幾點:
1、避免使用鹽酸鹽,鹽酸鹽對鋼質(zhì)有腐蝕作用;
2、緩沖液要現(xiàn)配現(xiàn)用,往往緩沖液是良好的菌類培養(yǎng)液,隔天或放置長時間實驗時會發(fā)生很多怪現(xiàn)象;
3、使用緩沖液要及時掌握pH范圍,做到胸中有數(shù);
4、清洗液路和柱子時,有溫控可加熱到30攝氏度易于沖洗;
5、長時間用緩沖溶液要注意觀察接頭處有無析出,若有白色鹽類析出,定期用10%硝酸沖洗液路可以避免液路的堵塞;
6、選擇緩沖液要用的試劑,避免不純的鹽類造成不必要的麻煩;