C4反相色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在乙腈-水中的;由于色譜柱在儲(chǔ)存或運(yùn)輸過程中固定相可能會(huì)干掉,這會(huì)引起鍵合相的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。因此,新的色譜柱在用來分析樣品之前,請一定要充分平衡色譜柱。
C4反相色譜柱的平衡方法是:以純乙腈或甲醇作流動(dòng)相,首先用低流速0.2ml/min將色譜柱平衡過夜(請注意斷開檢測器!),然后,將流速增加到0.8mL/min沖洗30min以便將色譜柱的填料充分平衡至*狀態(tài)。平衡過程中,將流速緩慢地提高直到獲得穩(wěn)定的基線,這樣可以保證色譜柱的使用壽命,并且保證在以后的使用中,獲得分析結(jié)果的重現(xiàn)性。請一定確保所使用的流動(dòng)相和乙腈-水互溶。如果您所使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽,應(yīng)注意首先用20倍柱體積的5%的乙腈-水流動(dòng)相“過渡”,然后使用分析樣品的流動(dòng)相直至得到穩(wěn)定的基線。
對于正相色譜柱來講,硅膠柱或極性色譜柱需要更長的時(shí)間來平衡。這些色譜柱在出廠測試后是保存在正庚烷中的,如果極性色譜柱需要使用含水的流動(dòng)相,請?jiān)谑褂昧鲃?dòng)相之前用乙醇或異丙醇平衡。C4反相色譜柱當(dāng)使用乙醇、異丙醇、乙酸等粘度大的流動(dòng)相時(shí),色譜柱的平衡時(shí)間要延長,甚至要加倍。